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AAV在眼部注射方法有哪些

肺部注射包括鼻内滴注法和气管插管术。鼻内滴注法操作简单，直接将病毒悬液滴入鼻腔，但颗粒可能沉积在上呼吸道，需要较大剂量的病毒。气管插管术能将病毒载体直接输入肺部，避免上呼吸道损失，但需特殊设备和技巧。此外，还有气管内注射，操作与鼻内滴注法类似，但直接注入气管。

麻醉小鼠，确保其对疼痛刺激无反应。2） 保护小鼠眼睛，保持湿润并抑制眨眼反射。3） 保持小鼠体温，防止麻醉后过低。4） 清洁小鼠耳朵，并消毒。5） 打开鼓室大疱，暴露镫骨动脉和圆窗膜。6） 轻轻在圆窗膜中心穿刺，观察液体流出。7） 将0.6~2μL的AAV载体注射至耳蜗鼓阶。

AAV因其特异性而成为首选载体，不同血清型针对特定组织有较高感染能力，通过合适注射方法可实现体内特异性表达。实现特异性表达的方法包括选择组织特异性血清型、使用细胞特异性启动子以及局部注射等。

圆窗膜（RWM）注射方法，适用于新生小鼠和非人灵长类动物，载体可传送至耳蜗鼓阶的外淋巴。此方法对内耳外毛细胞转导率相对有限。具体操作包括麻醉小鼠，消毒耳朵，切开皮肤露出鼓室大疱，然后在大疱上穿孔，使用移液管在RWM中心轻轻穿刺，注入0.6~2μL的AAV载体，封孔并缝合伤口。

如hSyn启动子常用于神经元特异性表达，Mecp2启动子则在神经元中优先表达。最后，AAV的注射方式包括脑立体定位、脑室注射等，这些方法能够实现基因在特定神经区域的精确表达。以脑立体定位为例，如图9所示，通过AAV9结合CamKIIα特异性启动子在小鼠海马区进行注射，可以实现基因在兴奋性神经元的特异性表达。

首先，对实验动物进行称重和麻醉，确保动物处于完全麻醉状态。 然后，清理动物头顶眼睛至耳朵之间区域的毛发，确保注射区域的清洁与无干扰。 将麻醉后的动物固定于脑立体定位仪上，确保头部固定，鼻对中线，头部不动，提尾不掉，大脑放置水平。 手术过程中，消毒清理动物头皮，暴露颅骨表面。